ISO测试是顶级机的一大看点，也代表着目前数码相机ISO的最佳表现，与尼康D5恐怖的ISO3280000不同，佳能在这个方面依旧按着自己的步伐前进，最高扩展ISO为409600。RAW格式拍摄，F5.6光圈。
从低ISO来看，仅仅可以从ISO3200看出一点点的杂色，但是实在是不明显，对于成熟的顶级机型，1D系列在低ISO下的表现就没有让人失望过，此次更新也不例外。
重点部分为高ISO部分。ISO12800是一个分水岭，从ISO12800开始可以看到比较轻微的噪点出现，轻度的影响画面，ISO继续提升，颗粒感继续增加，但是彩色噪点没有出现，到了ISO51200，噪点比较明显，不过画面中的暗部、亮部和质感体现上仍可以清晰辨认，相信对RAW格式处理有经验的人会在降噪软件的帮助下大幅改善。
对于扩展ISO，其实用到的情况比较少，不过既然D5都扩展到ISO3280000了，佳能EOS-1D X Mark II也给出了3档扩展，不过在看到扩展的3档ISO表现后，不难发现这三档的表现比较稳定，都可以辨认出拍摄物体，这说明一定程度上是实用的。
如果实用JPEG格式拍摄，相信经过机内降噪后，噪点的表现会更好一些。
