相比前作D200，D300的外观几乎没有什么变化，按键布局如出一辙，最明显的变化就是D300手柄处“超人红内裤”的倾斜设计和背面3英寸LCD屏幕，其他的细微变化就是背面个别按键的位置调换，并且增加了LV（Live View）实时取景选项。在体积上，两机几乎大小一样，D300稍高一些，但是由于使用了镁合金外壳，所以在总量上反而比D200要轻一些，握在手中感觉手感、重量、操作性都非常完美。
D300正面看上去和D200几乎一样，如果不是手柄处的红色标记和“D300”的LOGO我们几乎看不出来它与D200的区别，镜头周围的三个按键分别是镜头释放钮、景深预测钮和Fn钮，机身右侧的接口与D200不同，D200在这里只有一个闪光同步接口，并且是用塑料旋钮盖上的，而D300在这里多了一个十针的遥控终端，而这两个接口都是用一个橡胶盖，这一点和D3的设计是一样的。
