2009年12月17日，佳能公布EOS 5D Mark II最新固件，版本号为Version 1.2.4。
新固件增加了如下内容：
1、兼容即将上市的WFT-E4 II C无线文件传输器。EOS 5D Mark II安装WFT-E4 II C后可以通过有线或无线网络（也支持IEEE 802.11a）进行数据传输，并能够实现无线实时显示拍摄等遥控拍摄功能。此外，WFT-E4 II C还兼具电池盒兼手柄的功能，且具备竖拍快门按钮等各种控制按钮及拨盘。
2、修正相机在返※※ulb 撮影时，图片出现噪点多的现象。
EOS 5D Mark II采用2111万有效像素CMOS图像传感器，其尺寸和传统的35mm规格胶卷尺寸相同，相对于目前主流全画幅数码单反标准要大。配备高性能DIGIC 4提供卓越的图像质量。机身背面设置了92万像素3.0英尺液晶显示器，具有宽视角、高亮度和低耗能的特点。
