左肩转盘上，以前在D300上的Lv模式放到屏幕旁边去了，这里又多了一个Q模式，这就是传说中的安静快门模式，很实用的一个新功能，我们后面详细说。再有的变化就是在机身左侧的接口部分，D300在这里只有视频输出、高清、电源、和mini USB接口，而D300s在这里增加了一个麦克风接口，这一设计完全是为了新增加的视频短片拍摄功能而准备的。
内部功能的变化，最显著的就是新增加了视频短片拍摄功能，短片功能不需要单独的按键来开启，而是集成在了Lv实时取景功能中，开启实时取景后，屏幕的中间是一个圆形的水平仪，这也是D300s上新增加的功能。如果相机在横向和纵向保持水平，水平仪中间的横线会显示成绿色，否则就是黄色。
视频录制的操作在屏幕上都有信息提示，屏幕的右上方显示当前存储卡容量可以拍摄短片的时长，开始和停止都是按十字键中间的确定键，还可以通过组合键来进行快速的设置，按住回放键后再按十字键的左右键可以在录音、感光度和屏幕亮度之间切换，选中相应调节项后就可以通过十字键的上下键进行调节了。麦克风有四档可供选择：自动、高、标准、低和关闭。而在视频拍摄时采用的对焦方式也有所突破，在视频拍摄过程当中，可以手动调焦，也可以通过按AF-ON按键来启动对比侦测自动对焦功能，虽然对焦速度有些缓慢，但是比只能通过手动调焦来实现对焦的方式要先进得多了。
