EF 400mm f/2.8L IS II USM的自动对焦性能也值得称赞，本来佳能的机身对焦系统就非常非常先进，加之400mm F2.8内置了USM马达，可以在极短时间内进行合焦。另外佳能公司对它的对焦速度还推出过升级固件，用来不断改进它的对焦性能，建议它的用户及时的升级。
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